Geração de organoides cerebelares maduros a partir de células-tronco pluripotentes induzidas usando biorreatores de uso único

Semeie células-tronco pluripotentes induzidas por humanos, ou iPSCs, em um biorreator. As iPSCs são ressuspensas em meios contendo um inibidor de apoptose celular.

Sob um campo magnético, a roda vertical do biorreator gira a uma velocidade controlada, facilitando o contato célula-célula e a formação de agregados. Remova a maior parte do meio e adicione um novo meio sem o inibidor.

Continue cultivando. Quando os agregados atingirem um tamanho ideal, deixe-os assentar por gravidade. Remova o meio.

Adicione meios de diferenciação contendo fatores de crescimento e cultura com uma velocidade reduzida da roda do biorreator. Os fatores de crescimento promovem a diferenciação neural dentro dos agregados.

Em seguida, adicione meio fresco suplementado com fatores de crescimento e quimiocinas que induzem o desenvolvimento de progenitores cerebelares.

Gradualmente, os progenitores cerebelares se organizam em camadas distintas dentro dos agregados, formando organoides cerebelares iniciais.

Finalmente, adicione um meio neuronal contendo fatores neurotróficos específicos.

Esses fatores induzem a maturação do progenitor cerebelar em neurônios cerebelares funcionais sinapticamente ativos, gerando o