Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 6:18 min. • July 8th, 2025
Pegue um cérebro de camundongo perfundido contendo um tumor.
A etapa de perfusão remove as células imunes circulantes, mas retém as células infiltradas pelo tumor.
Isole o tecido que contém o tumor.
Agora, dissocie mecanicamente o tecido.
A força mecânica solta o tecido, liberando as células.
Transfira o tecido dissociado para um tubo.
Centrifugue e descarte o sobrenadante contendo detritos.
Ressuspenda o tecido em uma solução de digestão contendo colagenase e DNase.
A colagenase degrada a matriz extracelular, liberando as células. DNase degrada o DNA contaminante.
Adicione um tampão para interromper a atividade enzimática.
Filtrar a suspensão para remover os agregados celulares e obter uma suspensão unicelular.
Centrifugue e descarte o sobrenadante.
Ressuspenda as células em um meio de gradiente de alta densidade. Agora, sobreponha com um meio de gradiente de densidade mais baixa, formando um gradiente de separação com uma interface clara.
Centrifugue para separar as camadas. As células imunes se reúnem na interface entre os meios de gradiente enquanto os detritos celulares flutuam no topo.
Colete as células imunes para análise posterior.
Neste procedimento, usando uma lâmina de b
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