Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:16 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços revestida com uma matriz extracelular, ou ECM.
Em poços separados, introduza células-tronco pluripotentes humanas não transgênicas e transgênicas, ou hPSCs, em um meio de cultura.
As hPSCs transgênicas carregam um transgene sob um promotor induzível por antibióticos. O transgene codifica um fator de transcrição que induz a diferenciação neural.
Incubar para facilitar a adesão celular ao ECM. Pequenas moléculas no meio impedem a apoptose, promovendo a proliferação celular.
Adicione uma solução de descolamento para dissociar as células; adicione o meio para interromper a dissociação e, em seguida, transfira-os para outra microplaca revestida com ECM para permitir a proliferação celular.
Introduzir um meio de diferenciação neural contendo pequenas moléculas nas células não transgênicas e o antibiótico indutor nas células transgênicas.
As pequenas moléculas induzem células não transgênicas a se diferenciarem em células progenitoras neurais ou NPCs. Nas células transgênicas, a expressão induzida por antibióticos do fator de transcrição ativa os genes necessários para a diferenciação em NPCs.
Mantenha os NPCs em cultura para aplicativos downstream.
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