Gerando esferas de co-cultura 3D de astrócitos e neurônios para induzir a formação de sinapses

Pegue uma placa multipoços revestida com um surfactante para reduzir a tensão superficial do poço.

Adicione a proporção desejada de astrócitos e neurônios em um meio de cultura adequado.

Centrifugue para assentar as células e depois incube.

A baixa tensão superficial evita que as células grudem na superfície do poço, causando sua agregação.

As células aderem umas às outras por meio de várias interações de membrana, incluindo moléculas de adesão, formando uma esfera de cocultura 3D.

Colete as esferas e transfira-as para um tubo.

Deixe as esferas se acomodarem. Remova o sobrenadante e adicione um novo meio de cultura.

Transferir as esferas para um balão giratório contendo um meio de cultura adequado e incubar com centrifugação constante.

Na esfera, os neurônios estendem as projeções um em direção ao outro, formando uma junção chamada sinapse, enquanto o astrócito se estende em direção à sinapse, estabelecendo uma estreita associação com os neurônios.

Adicione a proporção desejada de hAstros e hNeurons ou iNeurons dissociados em um volume total de dois mililitros a cada poço de uma microplaca. Centrifugue a placa a 100 vezes g por três minutos e retorne à incubadora por dois dias.

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