Isolamento de neurônios DRG e cocultura com precursores de células de Schwann para gerar células de Schwann

Pegue a medula espinhal de um embrião de rato com gânglios de raiz dorsal anexados, ou DRGs, contendo neurônios e células gliais.

Separe os DRGs individuais do cordão, transfira-os para um tubo e centrifugue, descartando quaisquer detritos de tecido.

Adicione enzimas para dissociar neurônios DRG e células gliais.

Gire as células e remova quaisquer detritos. Adicione um meio de manutenção neuronal e triture para gerar uma suspensão unicelular.

Transferir a suspensão para uma microplaca revestida com um substrato de cultura, promovendo a adesão celular.

Introduza um meio de purificação e incuba. Os agentes inibitórios do meio eliminam as células gliais em divisão, enquanto os neurônios que não se dividem sobrevivem.

Pegue células semelhantes a células de Schwann, ou SCLCs, em um meio de co-cultura. Os CPPCs, precursores das células de Schwann, interagem com neurônios embrionários de nervos periféricos.

Introduza a suspensão nos neurônios DRG e incuba. A interação dos SCLCs com neurônios DRG promove sua maturação em células de Schwann.

As células de Schwann geradas estão prontas para análise.

Para colher os gânglios da raiz dorsal, transfira o primeiro embrião para uma placa de cultur