Replating de neurônios diferenciados derivados de células-tronco pluripotentes humanas

Comece com uma grande placa de cultura contendo neurônios diferenciados derivados de células-tronco pluripotentes humanas com uma rede neuronal densa.

Incube esses neurônios com enzimas proteolíticas leves para separá-los da placa, levantando-os como uma folha.

Com a incubação contínua, as enzimas interrompem parcialmente as conexões celulares, afrouxando as redes neuronais.

Adicione um meio de cultura para interromper a atividade enzimática.

Pipete repetidamente os neurônios destacados para separá-los uns dos outros.

Filtre os neurônios através de um filtro de células para remover aglomerados de células e coletar os neurônios individuais.

Centrifugue e remova o sobrenadante. Ressuspenda-os em um meio de crescimento.

Para replatinar, semeie esses neurônios em um polímero e uma placa de vários poços revestida com proteína de adesão. Incube para permitir sua fixação.

Os neurônios utilizam nutrientes do meio para se manterem viáveis. Substitua o meio de cultura regularmente para manter os níveis de nutrientes.

Incubar ainda mais para permitir a maturação neuronal e a formação de conexões entre eles.

Comece enxaguando suavemente a placa de neurônios diferenciados com PBS. Disperse o PB