JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:20 min • July 8th, 2025
Comece com células-tronco nervosas cultivadas em uma lamínula revestida com matriz extracelular em um meio de diferenciação adequado.
Pegue uma seringa contendo um plasma frio, que é um estado da matéria contendo vários componentes reativos, incluindo radiação UV e partículas carregadas.
Posicione o bico da seringa de plasma a uma altura específica acima da cultura de células nervosas.
Inicie o jato de plasma.
O plasma interage com as células-tronco nervosas, ativando-as.
Remova o antigo meio de cultura. Adicione um meio de cultura fresco e incube.
Com o tempo, as células-tronco nervosas ativadas produzem projeções.
Descarte o meio.
Sob um microscópio de luz de contraste de fase invertida, a presença de projeções alongadas nas células, semelhantes às encontradas em uma célula nervosa, indica diferenciação.
Para tratar as células-tronco neurais, defina a distância entre o bico da seringa e o primeiro poço de células para 15 milímetros. Substitua os sobrenadantes nas culturas de células-tronco neurais por 800 microlitros de meio de diferenciação fresco e coloque a placa sob os jatos de plasma.
Certificando-se de que o bico da seringa esteja fixado no centro de cada poço, crie três poços com plasma por 60 segundos por tratamento e três poços com 1% de hélio e gás oxigênio por 60 segundos por tratamento, deixando três poços sem tratamento como controles. Em seguida, substitua os sobrenadantes por um mililitro de meio de diferenciação fresco e retorne as células à incubadora por seis dias. Verifique o status de diferenciação dos diferentes grupos diariamente sob um microscópio de luz de contraste de fase invertida.
Após o tratamento, deixar as células completamente equilibradas no meio condicionado durante cerca de uma hora antes de substituir o sobrenadante por um meio de diferenciação fresco.