Geração de precursores de interneurônios corticais a partir de células-tronco embrionárias de camundongos

Tome células-tronco embrionárias de camundongo suspensas em meio sem soro contendo inibidores de pequenas moléculas.

Semeie as células em uma placa de cultura não aderente, permitindo que elas proliferem e se agreguem para formar corpos embrióides tridimensionais ou EBs.

Além disso, os inibidores bloqueiam as vias de sinalização não neuronais e induzem a diferenciação de células-tronco embrionárias em direção a um destino neural cortical.

Transfira os EBs para um tubo, centrifugue e remova o sobrenadante.

Ressuspenda os EBs em uma solução contendo um coquetel de enzimas e DNase.

As enzimas dissociam os EBs em células únicas, enquanto a DNase degrada o DNA contaminante.

Adicione meios sem soro contendo inibidores para interromper a atividade enzimática e, em seguida, centrifugue e remova o sobrenadante contendo enzimas.

Ressuspenda as células em meios contendo inibidores de moléculas pequenas e transfira-as para placas de cultura revestidas com fatores de adesão.

As células se ligam à superfície da placa revestida.

Os inibidores previnem a morte celular apoptótica e induzem a diferenciação celular em progenitores interneurônios corticais.

Comece a cultivar as células como corpos emb