Geração de progenitores neurais a partir de células-tronco embrionárias de camundongos pelo método Hanging Drop

Pegue uma suspensão de células-tronco embrionárias de camundongo.

Centrifugue, remova o sobrenadante e ressuspenda as células em um meio de diferenciação neural.

Coloque as gotículas da suspensão no lado interno da tampa de uma placa de cultura.

Adicione um tampão à placa inferior para evitar que as gotículas sequem. Coloque a tampa na placa inferior, formando uma cultura de gota suspensa, e incuba.

Devido à gravidade, as células se agrupam e formam agregados tridimensionais denominados corpos embrióides ou EBs.

Coloque as gotículas em uma placa contendo o meio de diferenciação e incube sob agitação para o crescimento de EBs.

Centrifugar e remover o meio; ressuspender os EB no meio de diferenciação suplementado com ácido retinóico, transferi-los para uma placa de cultura e incubar.

O ácido retinóico entra nas células e desencadeia a formação de um complexo de transcrição. O complexo induz a expressão gênica, desencadeando a diferenciação em células progenitoras neurais.

Os EBs diferenciados estão prontos para aplicações downstream.

Comece configurando a cultura de células suspensas. Para uma placa de cultura de células de 10 centímetros, ajuste a concentração para 500 células por 2