Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:35 min. • July 8th, 2025
Pegue o pequeno RNA interferente, ou siRNA, um tipo de RNA envolvido no silenciamento de genes.
Adicione vesículas lipídicas esféricas chamadas lipossomas.
O lipossoma encapsula o siRNA, protegendo-o da degradação.
Adicione complexos siRNA-lipossomas a um poço de cultura contendo células-tronco neurais. Mantenha um bem como controle e incuba.
O lipossomo se funde com a membrana celular, liberando o siRNA.
O siRNA se liga ao complexo de silenciamento induzido por RNA, ou RISC, onde uma fita é removida.
A fita restante tem como alvo o mRNA responsável pela diferenciação celular, levando à sua degradação.
Adicione um meio de diferenciação adequado aos poços.
No poço controle, os fatores de crescimento e outros nutrientes do meio promovem a diferenciação das células-tronco neurais em osteoblastos.
Usando técnicas de coloração adequadas, core marcadores específicos de osteoblastos nas células e comente o núcleo com um corante fluorescente azul.
A ausência de marcadores específicos de osteoblastos nas células silenciadas por genes indica sua incapacidade de diferenciação.
Para realizar o knockdown de siRNA em células O9-1, recupere e semeie as células. Diluir os lipossomas num volume ade
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos