Isolando colônias de células progenitoras neurais induzidas derivadas de fibroblastos humanos adultos

Comece com uma cultura aderente de colônias de células progenitoras neurais induzidas derivadas de fibroblastos humanos adultos em uma placa de vários poços revestida com laminina.

Lave as colônias com um tampão para remover as células não aderentes e, em seguida, adicione um tampão novo.

Raspe ao redor de colônias individuais para remover as células circundantes.

Transfira as colônias para poços frescos revestidos de laminina contendo meio de neuroindução.

Desagregar mecanicamente as colônias para obter uma suspensão unicelular.

A laminina, uma proteína da matriz extracelular, interage com as proteínas de superfície dos progenitores, facilitando a adesão celular à superfície do poço.

Adicione um inibidor de molécula pequena que entra nas células e bloqueia proteínas quinases específicas, evitando a apoptose celular.

Fatores de crescimento e pequenas moléculas presentes no meio de neuroindução facilitam a proliferação dos progenitores.

Substitua periodicamente o meio para repor os nutrientes, facilitando a proliferação contínua de progenitores.

Uma cultura confluente, ou uma camada de células totalmente coberta, indica a expansão bem-sucedida das células progenitoras neurais induzi