Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:32 min. • July 8th, 2025
Introduza fibroblastos dérmicos humanos adultos ou aHDFs, suspensos em um meio de fibroblastos, em uma microplaca revestida com proteína da matriz extracelular. Incubar para permitir a adesão celular.
Introduzir um vetor lentiviral transgênico. Após a internalização na célula hospedeira, o RNA viral é transcrito reversamente em DNA, que se integra ao genoma do hospedeiro.
O DNA viral expressa fatores de transcrição e RNAs de grampo curto, ou shRNAs. As nucleases celulares processam os shRNAs em pequenos RNAs interferentes ou siRNAs.
Os siRNAs gerados degradam o mRNA que codifica os repressores transcricionais, inibindo assim sua expressão e permitindo a ativação de genes de diferenciação neuronal.
Os fatores de transcrição ativam os genes, promovendo a diferenciação neuronal das aHDFs.
Remova o meio que contém os vetores não internalizados.
Adicione um meio de conversão neuronal inicial contendo fatores de crescimento e pequenas moléculas que induzem a diferenciação em células semelhantes a neurônios.
Substitua o meio por um meio de conversão neuronal tardia contendo fatores neurotróficos para maturação em neurônios.
Os neurônios maduros estão prontos para ensaios a jusante.
Prepar
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