Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:12 min. • July 8th, 2025
Comece com um cérebro de filhote de rato.
Isole o cerebelo e obtenha fatias de tecido de espessura adequada.
Transfira as fatias para inserções de membrana colocadas dentro de poços de placa de cultura contendo meio.
Em poços tratados, o meio contém um composto de teste neuroprotetor. Os poços de controle não têm o composto. Incubar.
Sob condições de controle, as células cerebelares de Purkinje sofrem apoptose, mimetizando o desenvolvimento pós-natal precoce in vivo.
Em poços tratados, dependendo de seu potencial, o composto pode proteger as células da apoptose.
Lave as fatias e fixe-as para preservar a integridade celular.
Transfira as fatias para uma solução de bloqueio de permeabilização para permeabilizar as membranas celulares e bloquear locais de ligação não específicos.
Sobreposição com anticorpos primários direcionados a uma proteína de ligação ao cálcio especificamente expressa em células de Purkinje.
Lave e introduza anticorpos secundários conjugados com fluoróforo direcionados aos anticorpos primários.
Contra-core os núcleos com um corante de ligação ao DNA e monte as fatias.
Usando um microscópio confocal, quantifique as células de Purkinje viáveis para identificar o po
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