Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:34 min. • July 8th, 2025
Pegue o filhote de rato cerebella.
Homogeneize-os em fragmentos menores.
Adicione uma enzima proteolítica para digerir a matriz extracelular do tecido, soltando os progenitores granulares cerebelares, ou CGNPs, e os astrócitos.
Adicione meios de cultura CGNP contendo soro para interromper a atividade enzimática. Centrifugue e descarte o sobrenadante rico em enzimas.
Ressuspenda os fragmentos de tecido em meio CGNP. Dissocie mecanicamente o tecido para liberar as células.
Assim que os detritos assentarem, transfira o sobrenadante contendo as células para um novo tubo.
Centrifugue e remova o sobrenadante com detritos.
Ressuspenda as células em meio CGNP e semeie-as em poços de placas de vários poços revestidos com poli-D-lisina. Incubar.
Os astrócitos se depositam e aderem fortemente ao revestimento de poli-D-lisina, em comparação com os CGNPs.
Agitar a placa e recolher o sobrenadante que contém CGNP. Centrifugar e retirar o sobrenadante.
Ressuspenda os CGNPs em meio CGNP e semeie-os em uma placa multipoços revestida com poli-L-ornitina. Incubar.
Os CGNPs se ligam à superfície revestida e proliferam, auxiliados pelos componentes do meio e pela poli-L-ornitina.
Transfira de três a cin
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