Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:24 min. • July 8th, 2025
Pegue a retina de um rato, uma camada sensível à luz do olho contendo neurônios ganglionares da retina, ou RGNs.
Coloque a retina em uma solução salina balanceada a frio para evitar danos aos tecidos.
Transfira a retina para uma solução contendo protease e DNase e corte-a em pedaços menores.
Transfira o conteúdo para um tubo e incuba.
A protease quebra a matriz extracelular e solta as células, enquanto a DNase degrada qualquer DNA contaminante.
Pipete para cima e para baixo para dispersar os aglomerados de células.
Adicione uma solução inibidora para interromper a ação da protease.
Centrifugue as células para assentá-las. Remover o sobrenadante e ressuspender as células num meio de cultura adequado.
Adicione esta suspensão celular à monocamada de glia de revestimento olfativo ou células OEG, um tipo de célula glial, e incube.
Os RGNs se integram à monocamada OEG, estabelecendo o modelo de cocultura para avaliar o potencial neuroregenerativo dos OEGs.
Coloque a retina em uma placa de cultura de células P-60 previamente preparada com 5 mililitros de EBSS frio. Em seguida, transfira para a placa de cultura de células P-60 com papaína reconstituída mais 50 microlitros de APV e 250 micr
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