Neurogênese induzida por ácido retinóico usando células de carcinoma embrionário de camundongo

Pegue uma suspensão de células de carcinoma embrionário de camundongo capaz de se diferenciar em vários tipos de células.

Células de sementes em uma placa de cultura hidrofóbica contendo meio e ácido retinóico.

incubar. As superfícies hidrofóbicas impedem a adesão celular, fazendo com que as células formem agregados.

O ácido retinóico entra nos agregados celulares, desencadeando vias de sinalização e causando diferenciação em células progenitoras neuronais.

Após a incubação, coletar os agregados celulares.

Descarte a mídia.

Adicione meios contendo ácido retinóico e semeie os agregados em uma placa de cultura hidrofóbica.

incubar. O ácido retinóico facilita a diferenciação celular sustentada em neurônios.

Colete os agregados e remova a mídia.

Adicione uma enzima proteolítica para interromper as aderências célula-célula dentro dos agregados.

Adicione meios contendo soro para interromper a atividade enzimática.

Dissociar mecanicamente os agregados, formando uma suspensão neuronal.

Centrifugue e descarte o sobrenadante rico em enzimas.

Ressuspenda os neurônios no meio e semeie-os em uma placa aderente de vários poços contendo meio.

incubar. Os neurônios aderem à placa e amadurecem, est