Isolando neurônios marcados com fluorescência de um cérebro murino

Pegue um córtex de camundongo transgênico contendo neurônios que expressam proteínas fluorescentes.

Prenda-o em um porta-amostras.

Monte o suporte na bandeja do vibratomo contendo aCSF oxigenado para manter as condições fisiológicas do tecido.

Usando parâmetros definidos, obtenha fatias coronais.

Coloque as fatias em um suporte de malha contendo aCSF oxigenado e bloqueadores de atividade para estabilizá-las.

Trate as fatias com proteases para digerir a matriz extracelular e soltar as células.

Lave com aCSF para remover as proteases.

Transfira as fatias para uma placa de cultura com aCSF e soro.

Sob um microscópio de fluorescência, disseque as regiões da fatia contendo neurônios fluorescentes.

Transferir os fragmentos dissecados para um tubo contendo aCSF e soro.

Dissocie mecanicamente o tecido para formar uma suspensão unicelular. Transfira as células para uma placa de cultura contendo aCSF.

Sob um microscópio de fluorescência, use uma pipeta capilar para coletar neurônios fluorescentes.

Dispense esses neurônios em uma placa de cultura contendo aCSF para análise posterior.

Disseque o cérebro de um camundongo sacrificado abrindo o crânio com uma pequena tesoura e extraindo o cérebro