Um método para gerar meio condicionado por oligodendrócitos

Pegue uma placa de Petri revestida de polímero.

Adicione a linhagem de oligodendrócitos ou células OL a um meio de cultura adequado e incuba.

A carga positiva no revestimento de polímero atrai a membrana celular carregada negativamente, aumentando a fixação da célula ao prato. Os fatores de crescimento e nutrientes no meio facilitam a expansão celular.

Substitua o meio por um meio pobre em nutrientes e incuba.

Baixos níveis de nutrientes induzem um leve estresse nas células, fazendo com que secretem proteínas, lipídios e outras moléculas, incluindo fatores de crescimento e citocinas, no espaço extracelular.

Colete o meio em um tubo.

Filtre esterilize o meio para remover detritos celulares e componentes insolúveis.

O filtrado contendo as moléculas bioativas solúveis secretadas pelas células OL é chamado de meio condicionado por oligodendrócitos ou OCM.

Armazene o OCM em temperaturas mais baixas até uso posterior para evitar a degradação de proteínas e outras moléculas, preservando assim a eficácia do OCM.

Placa de duas ou três placas de Petri pré-revestidas de 100 milímetros com 10 mililitros da suspensão celular.

Incube em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius sob 5% de dió