Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:01 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de Petri revestida de polímero.
Adicione a linhagem de oligodendrócitos ou células OL a um meio de cultura adequado e incuba.
A carga positiva no revestimento de polímero atrai a membrana celular carregada negativamente, aumentando a fixação da célula ao prato. Os fatores de crescimento e nutrientes no meio facilitam a expansão celular.
Substitua o meio por um meio pobre em nutrientes e incuba.
Baixos níveis de nutrientes induzem um leve estresse nas células, fazendo com que secretem proteínas, lipídios e outras moléculas, incluindo fatores de crescimento e citocinas, no espaço extracelular.
Colete o meio em um tubo.
Filtre esterilize o meio para remover detritos celulares e componentes insolúveis.
O filtrado contendo as moléculas bioativas solúveis secretadas pelas células OL é chamado de meio condicionado por oligodendrócitos ou OCM.
Armazene o OCM em temperaturas mais baixas até uso posterior para evitar a degradação de proteínas e outras moléculas, preservando assim a eficácia do OCM.
Placa de duas ou três placas de Petri pré-revestidas de 100 milímetros com 10 mililitros da suspensão celular.
Incube em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius sob 5% de dióxido de carbono.
Em uma capela de fluxo laminar sob condições estéreis, renove o meio de cultura com 10 mililitros de meio baixo Mbb 27 quente.
Incube por 2 dias em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius sob 5% de dióxido de carbono.
Para colher o OCM, colete o sobrenadante contendo fatores secretados por oligodendrócitos. Esterilize o OCM com filtro usando um filtro de 0.22 mícron.