Isolando e cultivando células precursoras de oligodendrócitos do córtex cerebral de filhotes de camundongos

Pegue um córtex de filhote de rato.

Adicione uma enzima proteolítica que digere a matriz extracelular do tecido. Em seguida, dissocie mecanicamente o tecido, soltando as células.

Adicione meios gliais e DNase para degradar qualquer DNA contaminante.

Dissocie mecanicamente o tecido para liberar neurônios e células gliais.

Assim que o tecido não digerido assentar, colete o meio contendo as células e centrifugue. Remova o sobrenadante.

Ressuspenda as células em meio de glia e coloque-as em um frasco revestido de proteína de matriz extracelular.

incubar. Os astrócitos aderem mais fortemente à superfície revestida do que outras células. Os meios gliais promovem apenas a sobrevivência das células gliais.

Substitua a mídia para remover detritos.

Incube com agitação para separar as células precursoras de oligodendrócitos sobrepostas, OPCs e microglia.

Transfira o meio com as células para uma placa de cultura.

Incubar com agitação para facilitar a adesão microglial diferencial.

Transferir o sobrenadante OPC não aderente para uma placa de poli-D-lisina revestida com vários poços. Incubar para adesão ao OPC.

Substitua a mídia por mídia OPC, permitindo o crescimento do OPC.

Adicione 1 mililitr