Manuseio de culturas de células-tronco neuronais em uma instalação de produção de células

Para minimizar a contaminação em culturas de células-tronco neuronais, use uma instalação com uma capela laminar, uma câmara tampão, uma câmara de processo e uma câmara de microscópio, cada uma separada por portas herméticas.

Agora, encha com água em uma placa de cultura na incubadora para manter a umidade.

Ajuste a câmara tampão, a câmara de processo e os parâmetros da incubadora para níveis ideais.

Limpe todas as superfícies com um desinfetante e gaze estéril para eliminar contaminantes microbianos.

Coloque a placa de cultura de células-tronco neuronais primeiro na capa laminar que fornece ar filtrado.

Limpe a parte externa da placa com gaze embebida em etanol e transfira-a para a câmara tampão que fornece ar filtrado com níveis ideais de gás.

Por fim, mova a placa através da câmara de processo para a incubadora e feche a porta.

Após a incubação, mova a placa de cultura de volta para a câmara de processo junto com algum meio fresco.

Equilibre o meio fresco.

Fresque o meio na placa de cultura e volte a incubar a placa.

Coloque três placas de Petri na panela de água na base de cada incubadora. Encha esses pratos com água estéril e mantenha o nível de água nesses pratos, pois eles são essenciais para manter o ponto de ajuste de umidade relativa na incubadora.

Na interface gráfica, clique em Incubadora. Em seguida, clique no valor existente para umidade relativa sob o ponto de ajuste e insira 85%. Em seguida, clique na marca de seleção verde para aceitar esse valor.

Em seguida, ajuste as câmaras tampão, a câmara de processo e uma incubadora para os pontos de ajuste de gás necessários para o tipo de células que estão sendo introduzidas. Limpe a superfície da câmara de processo com gaze estéril e um desinfetante não inflamável, como produtos à base de cloreto de benzalcônio.

Em seguida, limpe as luvas e as superfícies que são comumente tocadas, como maçanetas. Em seguida, limpe a superfície da capela de fluxo laminar e da câmara tampão com etanol a 70% e deixe secar.

Depois disso, coloque o frasco ou placa de células no capuz e limpe brevemente sua superfície externa com uma esponja de gaze estéril saturada com etanol. Em seguida, colocar o balão ou a placa na câmara tampão e executar um factor de diluição. Após a conclusão, transfira imediatamente o frasco ou placa para a incubadora apropriada.

Como a incubadora está na parte de trás da câmara de processo, puxe uma prateleira para dentro da câmara de processo para colocação de células e evite abrir as portas da incubadora desnecessariamente ou por longos períodos de tempo.

Nesta etapa, prepare o meio de cultura celular. Deixe o meio se equilibrar com os níveis de dióxido de carbono e oxigênio presentes no sistema, deixando o recipiente de mídia ligeiramente destampado por 20 minutos.

Depois, remova o meio antigo dos poços. Para células-tronco pluripotentes, remova quase todo o meio antigo com uma pequena quantidade do meio antigo restante, para evitar a dessecação durante o processo de alimentação. Para células-tronco neurais, remova metade do meio antigo. Em seguida, adicione meio fresco às placas de cultura de células e coloque as placas de volta na incubadora designada.