Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 6:24 min. • July 8th, 2025
Comece com neuroesferas não aderentes, um agregado tridimensional de células-tronco neurais humanas em um meio condicionado derivado de cultura de células.
Este meio contém nutrientes, fatores de crescimento e componentes da matriz extracelular que mantêm a viabilidade celular.
Centrifugue para coletar as neuroesferas.
Trate-os com enzimas tripsina e DNase, misture o conteúdo e depois incube.
A tripsina interrompe a adesão célula a célula e facilita o descolamento celular, enquanto a DNase degrada o DNA livre para evitar a aglomeração celular.
Pipetar o conteúdo repetidamente para formar uma suspensão unicelular. Em seguida, adicione um inibidor de tripsina para neutralizar a atividade enzimática.
Centrifugue e remova o sobrenadante e, em seguida, ressuspenda as células em um meio de proliferação contendo fatores de crescimento neural.
Semeie a suspensão celular em uma lamínula revestida de polímero colocada em uma placa de vários poços. Incube para permitir a fixação da célula-tronco ao polímero.
Além disso, com base na absorção de fatores de crescimento específicos, as células-tronco se diferenciam em progenitores neurais e astrócitos, que estão prontos para maturação adicional e
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