Formação e expansão de neuroesferas a partir de um tecido hipocampal

Comece com um giro dentado hipocampal de camundongo pós-natal, um tecido cerebral rico em células-tronco neurais e progenitoras com capacidade de auto-renovação.

Adicione enzimas tripsina que dissociam a matriz extracelular do tecido, soltando as células.

Em seguida, remova as enzimas e lave o tecido repetidamente com um tampão.

Substitua o tampão por um meio de cultura de neurônios enriquecido com fatores de crescimento.

Pipete repetidamente para dissociar o tecido e liberar as células no meio.

Semear a suspensão de células diluídas numa placa de Petri não revestida e incubar.

As células-tronco e progenitoras utilizam nutrientes e fatores de crescimento para proliferar.

Com o tempo, eles se agregam espontaneamente, formando estruturas tridimensionais flutuantes denominadas neuroesferas primárias com uma população de células heterogênea.

Colete essas neuroesferas e descarte o sobrenadante. Ressuspenda as neuroesferas em um meio de cultura de neurônios e dissocie em uma suspensão unicelular.

Recultive essas células em uma placa de Petri não revestida para formar neuroesferas secundárias com uma população de células relativamente homogênea.

Para dissociar as amostras SVZ e DG, adicio