Co-cultura de células de Schwann com neurônios DRG em uma membrana pré-esticada

Pegue uma câmara de silício conectada a uma membrana de silício esticada e revestida com matriz.

Adicione gânglios da raiz dorsal ou suspensão de células DRG e incuba.

A matriz promove a fixação e multiplicação celular, enquanto a superfície esticada orienta o alinhamento do axônio.

Adicione inibidores de crescimento que eliminam as células gliais em divisão ativa, permitindo que os neurônios que não se dividem sobrevivam.

Remova o meio. Adicione um meio de crescimento e incube.

O neurônio detecta um aumento da rigidez da membrana na direção esticada e orienta o crescimento do axônio de acordo.

Adicione células de Schwann cultivadas e colhidas à cultura DRG e incuba.

As células de Schwann se ligam ao axônio regenerado, isolando o neurônio.

Isso aumenta a sobrevivência e a funcionalidade dos neurônios, estabelecendo uma co-cultura.

Antes de semear os neurônios DRG, remova a solução de PLL da câmara. Enxágue a superfície do PDMS com água estéril e seque-a ao ar. Depois de ressuspender as células, deixe a suspensão descansar por 1 a 2 minutos para permitir que os detritos se depositem no fundo do tubo. Em seguida, adicione 1,5 mililitros de suspensão celular em cada câmara de estirame