Geração de células endoteliais cerebrais a partir de células-tronco pluripotentes induzidas
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:35 min. • July 8th, 2025
Pegue uma cultura de células-tronco pluripotentes induzidas, ou iPSC, em meios de manutenção contendo inibidores da rho-quinase.
Os fatores de crescimento mantêm as células indiferenciadas, enquanto os inibidores da rho-quinase aumentam a sobrevivência celular.
Substitua o meio por um novo meio de manutenção, removendo os inibidores da rho-quinase. Incubar, promovendo a formação de colônias.
Substitua regularmente por meios não condicionados, que fornecem um ambiente controlado, desencadeando a diferenciação de iPSC em progenitores neurais e, em seguida, células endoteliais cerebrais, seguidas de proliferação celular.
Substitua por meios de células endoteliais contendo ácido retinóico e fatores de crescimento de fibroblastos. Incubar.
Os fatores de crescimento de fibroblastos facilitam a proliferação celular, enquanto o ácido retinóico promove a maturação das células endoteliais cerebrais.
Adicione enzimas proteolíticas para separar as células. Recolha as células e centrifugue. Descarte o sobrenadante.
Ressuspenda as células em meio endotelial e semeie-as em uma inserção de membrana de vários poços revestida com colágeno e fibronectina.
O poço contém meios endoteliais. Incubar para
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