Purificando capilares de um cérebro suíno

Pegue um cérebro suíno.

Remova as meninges, a membrana protetora que cobre o cérebro, para evitar a contaminação das células meníngeas.

Raspe a substância cinzenta, uma região rica em capilares, e colete o tecido em uma placa de cultura contendo meios.

Passe a substância cinzenta por uma seringa sem agulha para fragmentar o tecido.

Transfira os fragmentos para um homogeneizador e homogeneize para desintegrar ainda mais o tecido, liberando os capilares cerebrais.

Passe o homogeneizado por um filtro com um tamanho de poro específico para reter os capilares, permitindo que outras células cerebrais fluam.

Coloque o filtro em uma solução contendo enzimas e DNase.

As enzimas desprendem as células aderentes, enquanto a DNase degrada o DNA contaminante, facilitando o isolamento dos capilares puros.

Lave os capilares do filtro.

Adicione meios contendo proteínas séricas para inativar as enzimas.

Transfira os capilares para um tubo, centrifugue e remova o sobrenadante. Ressuspenda os capilares puros em meio fresco para análise posterior.

Para iniciar este procedimento, coloque os cérebros em uma bancada de fluxo estéril e lave-os suavemente com 1 litro de PBS em um béquer colocado no gelo. Em