Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:34 min. • July 8th, 2025
Pegue uma seção da coluna vertebral de um rato e divida-a para remover a medula espinhal.
Separe os gânglios da raiz dorsal, ou DRGs, um aglomerado de neurônios cercado por células gliais satélites, ou SGCs.
Coloque os DRGs em um meio de crescimento. Remova as raízes nervosas para reduzir a contaminação por SGC.
Trate com colagenase para degradar a matriz tecidual e lave para remover as enzimas.
Introduza tripsina para interromper as conexões intercelulares. Adicione um soro contendo proteínas que desativam a tripsina.
Adicione o meio de crescimento e dissocie mecanicamente o tecido. Filtrar a suspensão para isolar as células individuais e centrifugar para remover os restos do tecido.
Ressuspenda as células para colocá-las em camadas em um meio de gradiente de densidade e centrifugue.
Os neurônios com maior densidade se instalam na parte inferior, facilitando a separação dos SGCs.
Ressuspenda os neurônios em um meio de cultura. Transfira-os para um poço revestido com substrato de cultura, permitindo a fixação das células.
Suplemento com fatores de crescimento nervoso para sobrevivência neuronal.
Para obter os neurônios DRG após a coleta da medula espinhal, comece removendo todas as
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