JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:12 min • July 8th, 2025
Em resposta a estímulos externos, as células-tronco neurais cerebrais da Drosophila, ou NSCs, saem da quiescência, um estado de parada do ciclo celular, e se reativam para iniciar a proliferação.
Pegue as larvas de Drosophila recém-nascidas, um estágio em que as NSCs saem naturalmente da quiescência in vivo.
Segure os ganchos da boca e o corpo para dividir a larva.
Localize o cérebro atrás dos ganchos da boca e retire-o.
Transfira os cérebros para poços de placa de cultura contendo meios.
Nos poços tratados, o meio contém um hormônio de teste, enquanto os poços de controle não possuem o hormônio. Incubar.
Em condições de controle, os NSCs permanecem quiescentes devido à ausência de estímulos externos.
Em poços tratados, o hormônio se liga a receptores NSC específicos, ativando vias de sinalização a jusante e reativando os NSCs.
As NSCs reativadas entram no ciclo celular e sofrem proliferação.
Após a incubação, os cérebros agora estão prontos para análise a jusante para visualizar a proliferação do NSC, confirmando o potencial de reativação do hormônio.
Disseque os cérebros das larvas colocadas no segundo prato de relógio de vidro com SSM, usando uma pinça sob um microscópio de dissecação e ajustando a ampliação conforme necessário. Use uma pinça para agarrar os ganchos da boca e, com a outra, agarre suavemente o corpo até a metade e puxe na direção oposta para dividir a larva em dois pedaços. Depois de dissecar 15 a 20 cérebros, adicione 1 mililitro de SSM em um poço de uma bandeja de cultura estéril de 24 poços. Usando uma micropipeta e uma ponta estéril, transfira os cérebros recém-dissecados para o SSM, seguido de incubação do meio com cérebros por 24 horas a 25 graus Celsius.