Marcação de marcadores de superfície celular neural com azidoaçúcar durante a co-cultura com células endoteliais

Comece adicionando uma suspensão de células endoteliais do cérebro de camundongo à inserção da membrana permeável de uma placa transwell.

Adicione um meio de crescimento ao poço inferior e incube.

Os fatores de crescimento e nutrientes no meio ajudam as células a crescer como uma monocamada.

Remova o meio do fundo e do inserto.

Lave as superfícies interna e externa do inserto para remover quaisquer detritos.

Adicione um meio aderente à inserção e transfira a inserção para um poço revestido com matriz contendo células-tronco neurais corticais primárias e progenitoras, ou NSPCs, e incuba.

Adicione o azidoaçúcar, um análogo precursor do ácido siálico não natural, às células endoteliais e aos NSPCs e incube.

As citocinas e quimiocinas secretadas pelas células endoteliais promovem o crescimento das NSPCs em grandes clones semelhantes a folhas.

Os azidoaçúcares se integram às estruturas sialoglicanos na superfície celular do NSPC, marcando a glicoproteína. Isso permite a identificação de proteínas de superfície celular nos NSPCs expandidos.

Para preparar as células endoteliais, ressuspenda um pellet de células BEND3 de uma placa de Petri de 0,10 centímetro a 90% de confluência com 9 mili