Preparando tubos endoteliais cerebrais a partir de arteríolas parenquimatosas de camundongos

Prenda um cérebro de camundongo, com o lado ventral para cima, em uma placa revestida de polímero de silício contendo tampão.

Disseque uma seção de tecido do hemisfério ao redor da artéria cerebral média, ou MCA, com o segmento de tecido superior estendendo-se além do ponto de ramificação do Círculo de Willis.

Prenda o tecido com o MCA voltado para cima.

Remova a pia-máter, com as arteríolas, que se ramificam da ACM.

Prenda a pia-máter com as arteríolas. Disseque a arteríola e remova o tecido circundante. Descarte todos os ramos distais.

Incube a arteríola em um coquetel de enzimas proteolíticas para facilitar a digestão parcial do segmento.

Substituir as enzimas por tampão e transferir o segmento digerido para uma câmara contendo tampão numa fase microscópica equipada com uma pipeta de trituração.

Pipete a arteríola repetidamente para remover a adventícia solta e as células musculares lisas, resultando em um tubo intacto contendo células endoteliais arteriolares.

Coloque o lado ventral do cérebro voltado para cima em uma câmara contendo solução de dissecção fria para isolar as arteríolas parenquimatosas. Para isolar as artérias parenquimatosas, prenda o cérebro isolado com pinos d