Diferenciando células-tronco embrionárias de camundongos em uma população de neurônios em rede

Semeie células-tronco embrionárias de camundongos em um prato de baixa fixação contendo meios de diferenciação.

Incubar sob rotação para facilitar a agregação e diferenciação celular em uma linhagem neuronal.

Transfira os agregados para um tubo e deixe-os assentar por gravidade. Descarte a mídia.

Ressuspender e transferir os agregados para a placa de origem que contém meios de diferenciação suplementados com ácido retinóico.

O ácido retinóico induz a expressão gênica neuronal, desencadeando a diferenciação em células progenitoras neurais.

Transfira os agregados para um tubo. Remova a mídia e adicione tripsina para dissociar os agregados.

Adicione um inibidor para neutralizar a tripsina.

Pipetar repetidamente para obter uma suspensão celular homogénea. Filtre a suspensão para remover agregados.

Centrifugue e remova o sobrenadante. Ressuspenda as células na mídia.

Semeie as células em um prato revestido de polímero para facilitar a adesão celular.

Remova a mídia. Adicione novos meios contendo fatores de crescimento para promover a maturação neuronal e formar uma população de neurônios em rede.

A diferenciação de ESCs em neurônios começa durante uma passagem celular de rotina. Dissoci