JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:32 min • July 8th, 2025
Pegue um cérebro de rato imerso em um tampão gelado.
Remova o cerebelo e apare a seção anterior que contém o córtex pré-frontal medial, ou mPFC.
Prenda o tecido a um bloco de ágar angular, que é colado em um estágio de amostra de vibrato.
Anexe blocos de ágar adicionais para fornecer estabilidade durante o corte. Coloque o stage dentro da câmara de corte do vibratomo cheia de tampão gelado oxigenado.
Gere fatias inclinadas contendo a amígdala que respondem a estímulos de medo e projeções neuronais do mPFC, que formam conexões sinápticas na amígdala e regulam sua atividade.
Os cortes inclinados expõem as projeções, permitindo o estudo da conectividade funcional entre o CPFm e a amígdala.
Corte as fatias ao meio e coloque-as em uma câmara contendo líquido cefalorraquidiano artificial oxigenado em temperatura ambiente para estabilizar o tecido.
Incube as fatias na temperatura fisiológica para recuperar o tecido para ensaios a jusante.
Use um bisturi para cortar o cerebelo. Em seguida, isole a porção anterior do cérebro que contém o córtex pré-frontal medial. Encha a câmara de corte com solução de corte gelada mantida a 4 graus Celsius usando uma unidade de resfriamento. Oxigenar a solução.
Seque o cérebro com papel de filtro. Cole o bloco de ágar 4% que foi cortado em um ângulo de 35 graus em relação ao estágio vibratório e cole a parte posterior do tecido cerebral neste bloco. Cole dois blocos de ágar adicionais na frente e atrás do bloco cerebral para estabilidade durante o corte.
Coloque o stage com tecido preso na câmara de corte e certifique-se de que esteja submerso. Comece a cortar as fatias agudas. Corte cada fatia ao meio e transfira para uma câmara de interface fornecida com ACSF oxigenado à temperatura ambiente. Depois de cortar as fatias agudas da amígdala, coloque a câmara de interface em banho-maria a 36 graus Celsius e deixe as fatias se recuperarem por 35 a 45 minutos.