Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:43 min. • July 8th, 2025
Pegue o giro dentado de um cérebro de camundongo em um tampão de homogeneização a frio.
Dissocia-se mecanicamente para liberar neurônios, glia e células-tronco.
O detergente neutro do tampão permeia as células, liberando núcleos e outras organelas.
Filtre o homogeneizado para remover os detritos do tecido. Em seguida, centrifugue, remova as organelas e ressuspenda no tampão de homogeneização para lisar as células intactas.
Centrifugue novamente, remova o sobrenadante contendo organelas liberadas e ressuspenda os núcleos em um tampão de lavagem.
Filtre para remover quaisquer detritos, centrifugue e remova o sobrenadante.
Introduza uma coloração de DNA fluorescente para marcar todos os núcleos e um anticorpo conjugado com fluoróforo que se liga ao antígeno nuclear neuronal, ou NeuN, marcando os núcleos dos neurônios.
Usando a classificação de núcleos ativados por fluorescência, identifique agregados com maior intensidade de fluorescência de coloração de DNA e maiores propriedades de espalhamento, separando os núcleos individuais.
Analise os núcleos individuais, separando os núcleos neuronais NeuN-positivos e isolando os núcleos NeuN-negativos pertencentes à glia e às células-tronco.
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