Isolando células imunes de plexos coróides de camundongos
JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 4:13 min • July 8th, 2025
Posicione o cérebro de um camundongo com o lado dorsal para cima.
Sob um microscópio, separe os hemisférios cerebrais. Afaste o córtex e depois o hipocampo para expor os ventrículos laterais e o terceiro ventrículo.
Colete dois plexos coróides laterais. Estas são estruturas cerebrais ricas em células imunológicas que revestem os ventrículos laterais como um longo véu.
Colete o plexo coróide do terceiro ventrículo, que é uma estrutura curta com uma superfície granular.
Desconecte o cerebelo para expor o quarto ventrículo.
Colete o plexo coróide do quarto ventrículo, que é uma longa estrutura globular com uma superfície granular.
Coloque todos os plexos coróides em um tubo com solução salina tamponada para manter a integridade do tecido.
Adicione uma solução de enzimas digestivas e incube com agitação.
A enzima quebra a matriz extracelular e solta as células.
Adicione um tampão adequado para inativar a enzima.
Centrifugue para assentar as células. Rejeitar o sobrenadante e ressuspender as células num novo tampão para análise posterior.
Para começar, posicione o cérebro dissecado de um C57 preto 6 com o lado dorsal do camundongo para cima em uma placa de Petri e coloque a placa abaixo das objetivas das lupas binoculares. Enquanto mantém o cérebro no lugar usando uma pinça, insira as duas extremidades de outro par de pinças na linha média entre os hemisférios.
Usando a pinça, puxe o córtex com o caloso e o hipocampo para longe do septo, expondo o ventrículo lateral e uma parte do terceiro ventrículo. Identifique o plexo coróide lateral como um longo véu que reveste o ventrículo lateral e alargamento em ambas as extremidades. Em seguida, usando duas extremidades de uma pinça fina, colete o plexo coróide lateral. Tenha o cuidado de coletar a parte posterior triangular escondida pela dobra posterior do hipocampo.
Em seguida, puxe o córtex com o corpo caloso e o hipocampo do hemisfério contralateral, para longe do septo para expor todo o terceiro ventrículo e o ventrículo lateral oposto. Usando uma pinça fina, colete o terceiro plexo coróide identificado como uma estrutura curta com aspecto de superfície granular. Em seguida, colete o outro plexo coróide lateral.
Em seguida, insira as duas extremidades da pinça entre o cerebelo e o mesencéfalo e separe o cerebelo da ponte e da medula para expor o quarto ventrículo. Em seguida, identifique o quarto plexo coróide como uma estrutura globular longa com um aspecto de superfície granular que reveste o quarto ventrículo da extremidade lateral direita para a extremidade esquerda entre o cerebelo e a medula. Usando uma pinça fina, colete o quarto plexo coróide.
Depois de incubar todos os plexos coróides coletados com colagenase IV, pipete suavemente para cima e para baixo cerca de 10 vezes para finalizar a dissociação. Em seguida, encha o tubo até 1,5 mililitros com tampão MACS para interromper a atividade da colagenase IV. Em seguida, centrifugue as células e descarte o sobrenadante antes de lavá-las com 1,5 mililitros de tampão MACS. Depois de adicionar os grânulos de compensação apropriados e as soluções de anticorpos, incubar as amostras no gelo por 30 a 45 minutos, protegendo-as da exposição à luz. Em seguida, encha os tubos com 1,5 mililitros de tampão MACS.
Visão Geral
Este artigo detalha um método para isolar tecidos do plexo coroide de cérebros de camundongos, com foco específico nos ventrículos laterais e no quarto ventrículo. O procedimento inclui dissecação, tratamento enzimático e ressuspensão celular para análises posteriores.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia Celular
- Técnicas de Isolamento de Tecidos
Contexto
- O plexo coroide é uma estrutura crítica no cérebro que produz o líquido cefalorraquidiano.
- Desempenha um papel na resposta imune e na manutenção da homeostase no cérebro.
- Compreender sua composição celular é essencial para a pesquisa em neurociência.
- Técnicas de isolamento são necessárias para estudar o plexo coroide in vitro.
Objetivo do Estudo
- Fornecer um protocolo detalhado para o isolamento de tecidos do plexo coroide a partir de cérebros de camundongos.
- Facilitar a análise adicional dos componentes celulares do plexo coroide.
- Aprimorar a compreensão do papel do plexo coroide na função cerebral.
Métodos Utilizados
- Dissecação do cérebro de camundongo para expor os ventrículos laterais e o quarto ventrículo.
- Coleta de tecidos do plexo coroide usando pinças finas.
- Incubação com colagenase IV para dissociar as células.
- Centrifugação e ressuspendimento das células para análise.
Resultados Principais
- Isolamento bem-sucedido dos tecidos do plexo corióideo lateral e do quarto ventrículo.
- Dissociação eficaz das células para análises subsequentes.
- Manutenção da integridade do plexo corióideo durante o procedimento.
- O protocolo permite estudos imunológicos e celulares adicionais.
Conclusões
- O método descrito fornece uma abordagem confiável para o isolamento de tecidos do plexo coroide.
- Este protocolo pode ser utilizado para diversas aplicações posteriores em neurociência.
- Estudos futuros podem aprimorar nossa compreensão do papel do plexo coroide na saúde cerebral.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O isolamento de células imunes dos plexos coroides de camundongos permite a investigação precisa das interações neuroimunes relevantes para modelos de doenças do SNC. Essa capacidade apoia a validação precoce de alvos e a redução de riscos mecanicistas na descoberta de fármacos para doenças neuroinflamatórias e neurodegenerativas. O método fornece uma base para análise imunológica reprodutível e quantitativa em compartimentos cerebrais relevantes para doenças.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a avaliação direta de populações de células imunes em interfaces do SNC.
- Apoia estudos mecanicistas de vias neuroimunes implicadas em distúrbios cerebrais.
- Facilita a validação funcional de alvos em microambientes teciduais relevantes para doenças.
- Oferece uma plataforma para investigação orientada por hipóteses de estratégias de modulação imune.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaios
- Gera suspensões de células únicas validadas para ensaios de imunofenotipagem subsequentes.
- Padroniza o processamento de tecidos para garantir reprodutibilidade entre experimentos.
- Permite análise quantitativa de subpopulações de células imunes para triagem de compostos.
- Apoia o desenvolvimento de ensaios robustos e escalonáveis de células imunes a partir de tecidos do SNC.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Alinha o isolamento de células imunes com modelos do SNC relevantes para doenças em estudos translacionais.
- Permite a continuidade desde a descoberta até a validação pré-clínica da modulação imune.
- Apoia o avanço ajustado ao risco de alvos neuroimunes com base em dados celulares in situ.
- Fornece insights mecanicistas para orientar o desenvolvimento de biomarcadores na neuroinflamação.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este protocolo de isolamento de células imunes situa-se na interface entre a descoberta inicial e a pesquisa pré-clínica, permitindo estudos mecanicistas e o desenvolvimento de ensaios para programas direcionados ao SNC.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses sobre os papéis das células imunes na patologia do SNC.
- Triagem: Fornece preparações celulares reprodutíveis para ensaios imunológicos quantitativos.
- Análises: Permite a medição da composição e dos estados de ativação das células imunes.
- Pesquisa Translacional: Conecta descobertas iniciais à validação pré-clínica em sistemas relevantes para a doença.
- Reutilização Corporativa: Estabelece um fluxo de trabalho padronizado para o isolamento de células imunes do SNC em diferentes programas.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva na validação de alvos neuroimunológicos.
- Valor Operacional: Fornece isolamento celular padronizado e reprodutível para comparação entre estudos.
- Valor Estratégico: Reduz a ambiguidade mecanicista e apoia decisões informadas de avançar/não avançar.
- Impacto no Portfólio: Permite a priorização ajustada ao risco de alvos e vias neuroimunológicas.
Considerações sobre a Implementação
- Requer experiência em dissecação de cérebro de camundongo e manipulação de tecidos.
- Necessita de acesso a microscopia, reagentes para digestão enzimática e infraestrutura de citometria de fluxo.
- Exige padronização rigorosa entre equipes para garantir reprodutibilidade.
- Pode exigir adaptação para diferentes linhagens de camundongos ou modelos de doenças.
- O rendimento celular e a viabilidade dependem da execução precisa dos passos de dissecação e digestão.
Perguntas Frequentes sobre Biotecnologia Farmacêutica
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Última atualização: 29 agosto 2026