Isolando populações de células do tecido cerebral usando classificação de núcleos ativados por fluorescência

0 views • 3:14 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transfira um pedaço de tecido cerebral humano fresco congelado para um moedor adequado contendo tampão de lise fria.

Mova o pilão para cima e para baixo para quebrar mecanicamente o tecido, liberando as células.

As moléculas de detergente no tampão de lise abrem a membrana celular, liberando os núcleos.

Transfira o conteúdo para um tubo de centrífuga adequado e adicione tampão de sacarose frio no fundo do tubo, criando um gradiente de densidade.

Centrifugue em alta velocidade para separar os núcleos no fundo do tubo.

Rejeitar o sobrenadante e ressuspender os núcleos numa solução salina tamponada.

Adicione anticorpos conjugados com fluoróforo específicos do alvo aos núcleos e incube para permitir que o anticorpo se ligue à sua proteína nuclear alvo.

Adicione corante de coloração nuclear para visualizar o DNA intacto.

Realize a classificação de núcleos ativados por fluorescência para classificar os núcleos de diferentes populações de células com base em sinais de fluorescência distintos.

Comece a dissecar aproximadamente 200 a 400 miligramas de tecido de uma amostra de tecido do córtex adulto humano fresco e congelado. Coloque o tecido em um Douncer de tecido de vidro de 7 mililitros contendo 4 mililitros de tampão de lise gelada no gelo e triture o tecido aproximadamente 50 vezes.

Transferir o homogeneizado para um tubo de polipropileno ultracentrífugo de 12 mililitros. Use uma pipeta de 5 mililitros para adicionar 6,5 mililitros de tampão de sacarose gelada ao fundo do tubo de ultracentrífuga sem perturbar a interface entre a sacarose e o homogeneizado tecidual.

Para coletar os núcleos, ultracentrifugar o lisado por uma hora a 101.814 vezes g e aspirar cuidadosamente o sobrenadante e os detritos sem perturbar o pellet. Adicione PBS ao tubo de ultracentrífuga, ressuspendendo o pellet de núcleos.

Para a classificação ativada por fluorescência dos núcleos isolados, adicione aproximadamente 20 microlitros da amostra ressuspensa a uma solução de anticorpos contendo anticorpo anti-NeuN de camundongo conjugado com AlexaFlour555. Adicione aproximadamente 20 microlitros da amostra ressuspensa a uma solução de anticorpo contendo anticorpo anti-PAX6 de camundongo conjugado com APC. Após uma incubação de uma hora, a 4 graus Celsius com agitação protegida da luz, adicione DAPI na proporção de 1 para 1.000 a todas as amostras e controles.

07:56

Cultivo In Vivo-gosto murino astrócitos usando o protocolo AWESAM rápida, simples e barato

Related Videos

0 Views

06:22

Isolamento de núcleos de tumores cerebrais congelados frescos para RNA-seq de núcleo único e ATAC-seq

Related Videos

0 Views

08:16

Classificação negativa de neurônios por núcleos ativados por fluorescência combinada com sequenciamento de RNA de núcleos únicos para estudar o nicho neurogênico do hipocampo

Related Videos

0 Views

10:58

Isolamento Núcleos neuronais de Tecidos Humanos Postmortem Cérebro

Related Videos

0 Views

03:50

Isolamento de Microglia por Classificação de Células Acopladas por Imunocoloração: Um Método de Imunocoloração para Isolar Microglia de Células Cerebrais de Peixe-Zebra Usando Classificação de Células Ativadas por Fluorescência

Related Videos

0 Views

04:35

Isolando neurônios marcados com fluorescência de um cérebro murino

Related Videos

0 Views

04:43

Uma técnica para isolar núcleos de células não neuronais no giro dentado do hipocampo

Related Videos

0 Views

08:37

Usando fluorescência celular ativado Classificando a Examine-Cell-tipo específico Expressão Gênica em Tissue cérebro de um rato

Related Videos

0 Views

08:37

Fluorescência de células activadas (FACS) e Gene Análise da expressão de Fos-expressando neurônios de fresco e congelado cérebro de um rato Tissue

Related Videos

0 Views

07:49

Sequenciação do ARN de célula única de neurônios fluorescente etiquetadas do Mouse usando a classificação Manual e duplo In Vitro a transcrição com contagens absolutas sequenciamento (DIVA-Seq)

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026