Isolando populações de células do tecido cerebral usando classificação de núcleos ativados por fluorescência

Transfira um pedaço de tecido cerebral humano fresco congelado para um moedor adequado contendo tampão de lise fria.

Mova o pilão para cima e para baixo para quebrar mecanicamente o tecido, liberando as células.

As moléculas de detergente no tampão de lise abrem a membrana celular, liberando os núcleos.

Transfira o conteúdo para um tubo de centrífuga adequado e adicione tampão de sacarose frio no fundo do tubo, criando um gradiente de densidade.

Centrifugue em alta velocidade para separar os núcleos no fundo do tubo.

Rejeitar o sobrenadante e ressuspender os núcleos numa solução salina tamponada.

Adicione anticorpos conjugados com fluoróforo específicos do alvo aos núcleos e incube para permitir que o anticorpo se ligue à sua proteína nuclear alvo.

Adicione corante de coloração nuclear para visualizar o DNA intacto.

Realize a classificação de núcleos ativados por fluorescência para classificar os núcleos de diferentes populações de células com base em sinais de fluorescência distintos.

Comece a dissecar aproximadamente 200 a 400 miligramas de tecido de uma amostra de tecido do córtex adulto humano fresco e congelado. Coloque o tecido em um Douncer de tecido de vidro de 7 mililitros