Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:00 min. • July 8th, 2025
Pegue fragmentos de hipocampo de ratos perfundidos.
Incube com papaína para digerir a matriz extracelular do tecido e soltar as células, incluindo neurônios, astrócitos e microglia.
Adicione DNase e misture.
Dissociar mecanicamente o tecido usando pipetas de diâmetros progressivamente decrescentes para obter uma suspensão unicelular. Incube para que a DNase degrade o DNA contaminante.
Passe a suspensão por uma peneira, removendo os detritos.
Adicione tampão contendo íons divalentes para interromper a atividade enzimática.
Centrifugue e remova o sobrenadante rico em enzimas.
Agora, adicione tampão e esferas magnéticas anti-mielina. Incube para que as contas se liguem aos detritos de mielina.
Após a incubação, centrifugue e remova o sobrenadante.
Ressuspender a mistura em tampão e colocá-la numa coluna de separação magnética contendo esferas ferromagnéticas colocadas no campo magnético do classificador magnético.
O campo magnético retém detritos de mielina ligados a esferas magnéticas na coluna enquanto as células livres de mielina passam.
Lave a coluna com tampão e colete o fluxo contendo neurônios, astrócitos e microglia.
Comece a dissociação neural usando lâminas de barbear estére
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