Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:10 min. • July 8th, 2025
Pegue uma suspensão de células obtidas de vermes transgênicos Caenorhabditis elegans em um meio de cultura.
A suspensão contém células de vários tecidos, incluindo neurônios do sistema nervoso.
Os vermes transgênicos foram projetados para expressar uma proteína fluorescente conjugada a um transportador transmembrana vesicular. Este transportador, presente nas vesículas sinápticas que transportam o neurotransmissor acetilcolina, é encontrado em neurônios colinérgicos em todo o corpo.
Centrifugar a suspensão celular e rejeitar o sobrenadante. Ressuspenda as células em um meio de cultura fresco para classificação de células ativadas por fluorescência, ou FACS.
Analise a suspensão celular usando FACS. Os neurônios colinérgicos marcados com fluorescência emitem fluorescência após exposição à luz de comprimento de onda apropriado, separando-os de outras células não marcadas.
Transfira os neurônios isolados para uma placa de vários poços. Incube as células em uma câmara umidificada para manter o nível de umidade.
Centrifugue as células da suspensão de células isoladas a 10.000 vezes g e a 4 graus Celsius por 5 minutos. Rejeitar o sobrenadante e ressuspender as células peletizadas em meio
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