Diferenciação de células progenitoras óticas em células epiteliais sensoriais seguidas de imunomarcação
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:55 min. • July 8th, 2025
A cultura imortalizou células progenitoras óticas multipotentes, ou iMOP, em mídia.
Os fatores de crescimento no meio facilitam a proliferação de iMOP e a formação de colônias, criando otosferas.
Colete as otosferas e deixe-as assentar por gravidade.
Remova a mídia e adicione mídia de diferenciação sem fatores de crescimento. Placa nas otosferas.
A ausência de fatores de crescimento inicia a diferenciação de iMOP em células epiteliais sensoriais.
Colete as otosferas diferenciadas e deixe-as assentar.
Remova o meio e adicione um fixador para preservar a morfologia celular.
Em seguida, adicione um detergente para permeabilizar as membranas celulares e nucleares.
Adicione um tampão de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Introduzir anticorpos primários direcionados a um marcador de diferenciação específico.
Adicione anticorpos secundários conjugados com fluoróforo direcionados aos anticorpos primários, faloidina marcada com fluorescência para corar a actina e um corante de ligação ao DNA para corar os núcleos.
Monte as otosferas.
Usando microscopia de fluorescência, visualize a coloração para confirmar a diferenciação iMOP.
Três dias após o reforço, use a sedi
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