Diferenciando progenitores óticos multipotentes imortalizados em neurônios ganglionares espirais e avaliando a diferenciação

Pegue uma placa de vários poços contendo lamínulas estéreis revestidas com um substrato de cultura de células.

Introduza progenitores óticos multipotentes imortalizados, ou iMOPs, em um meio de diferenciação neuronal.

Os iMOPs são precursores de várias células do ouvido interno, incluindo neurônios ganglionares espirais, ou SGNs, que transmitem informações auditivas ao cérebro.

Incubar, permitindo que as células adiram ao substrato. O meio induz a diferenciação dos iMOPs em SGNs.

Adicione um fixador para induzir a reticulação de proteínas, preservando a morfologia celular, e uma solução detergente para permeabilizar as membranas celulares.

Introduzir um reagente de bloqueio para evitar a rotulagem não específica.

Adicione anticorpos conjugados com fluoróforo específicos para marcadores de diferenciação neuronal e incuba, permitindo que os anticorpos rotulem os SGNs.

Lave para remover anticorpos não ligados e monte as lamínulas com um meio de montagem contendo uma mancha nuclear fluorescente.

Usando microscopia de fluorescência, detecte os sinais de anticorpos para confirmar a diferenciação de iMOPs em SGNs.

Primeiro, limpe as lamínulas de vidro redondas, colocando-as em uma placa e