Cultura ex vivo e imagem de fatias oculomotoras de embriões de camundongos transgênicos

Pegue uma rata grávida transgênica, isole cirurgicamente o útero contendo embriões e lave-o para remover o sangue residual.

Remova os embriões contendo neurônios motores marcados com fluorescência e transfira-os para a tampa de uma placa de vários poços.

Adicione agarose derretida e esfrie a tampa para induzir a formação de gel, incorporando os embriões.

Sob um microscópio de fluorescência, alinhe os núcleos oculomotores e os olhos em uma linha e apare a agarose paralelamente à linha.

Fixe um embrião em um estágio de amostra e coloque-o em uma câmara de vibratomo cheia de um tampão de corte frio.

Usando o vibratome, gere fatias contendo os núcleos oculomotores e os olhos. Os núcleos formam os nervos oculomotores que controlam o movimento dos olhos.

Transfira as fatias para inserções de cultura dentro de uma placa de vários poços contendo um meio de cultura e incuba.

Usando um microscópio de fluorescência, faça imagens em intervalos regulares para observar os neurônios oculomotores marcados com fluorescência estendendo os axônios para alcançar os olhos.

Antes de iniciar o procedimento, primeiro confirme a gravidez por ultrassom no dia embrionário 10,5 a partir de um acasalamento cro