Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:15 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa de vários poços contendo células-tronco pluripotentes induzidas por humanos, ou iPSCs, em um meio com um inibidor de Rho-quinase, que promove a sobrevivência celular.
Substitua o meio por um meio essencial contendo nutrientes e fatores de crescimento.
Incubar para permitir a proliferação e diferenciação de iPSCs em células precursoras.
Substitua este meio por um meio de diferenciação suplementado com fatores de crescimento de fibroblastos e ácido retinóico e, em seguida, incube.
Os fatores de crescimento facilitam a diferenciação de células precursoras em células endoteliais microvasculares, enquanto o ácido retinóico promove a síntese de proteínas de junção apertada.
Lave e trate as células com uma solução enzimática-EDTA para separar as células, criando uma suspensão unicelular.
Centrifugue para coletar as células e remover o sobrenadante. Em seguida, ressuspenda as células em um novo meio de diferenciação.
Semeie esta suspensão celular em uma placa de vários poços revestida com colágeno e proteínas de adesão.
Incubar para permitir a adesão celular, formando junções apertadas entre as células, assemelhando-se às células endoteliais microvasculares cerebrais.
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