Dissecção e montagem de explantes cerebrais de larvas de moscas-das-frutas

Comece com as larvas de Drosophila, uma mosca da fruta, em uma solução salina fisiológica dentro de um prato. A solução evita que as larvas desidratem.

Sob um microscópio de dissecação, localize a extremidade anterior das larvas com os ganchos bucais.

A extremidade anterior contém os discos oculares e o sistema nervoso central, ou SNC, que compreende os lobos cerebrais e um cordão nervoso ventral.

Segure a extremidade posterior da larva usando uma pinça. Com outro par de pinças, puxe a extremidade anterior para extrair os órgãos internos.

Remova o intestino e os músculos anexados para isolar o SNC ligado aos discos oculares.

Para montar o explante cerebral, transfira o tecido extraído para a solução salina dentro de uma barreira de graxa em uma lâmina de vidro.

Certifique-se de que o lado dorsal do explante esteja voltado para cima e sele o tecido com uma lamínula. O explante cerebral está pronto para análise.

Para colher cérebros de larvas de Drosophila, sob um microscópio de dissecação, use um par de pinças de dissecação de ponta padrão número 5 para manter uma amostra larval no lugar, enquanto usa o outro para dissecar cuidadosamente o cérebro, preservando os discos oculares, lobos cerebrais e cordão nervoso ventral. Em seguida, remova os músculos anexados para minimizar qualquer movimento da amostra durante a imagem. Quando todos os cérebros tiverem sido colhidos, use graxa a vácuo para desenhar uma câmara quadrada em uma lâmina de vidro e adicione 20 microlitros de solução salina externa à câmara.

Use a pinça para transferir os cérebros para a câmara e ajustar as posições dos cérebros sob o microscópio, com os lados dorsais voltados para cima. Cubra a câmara com uma lamínula de vidro e pressione suavemente a lamínula para reduzir a deriva da amostra durante o procedimento de imagem.