Imunomarcação tecidual para citometria de massa por imagem

Coloque uma lâmina de vidro com uma amostra de tecido fixa em um tampão de recuperação de antígeno e aqueça-a.

A temperatura elevada e o pH alcalino do tampão quebram as ligações cruzadas de proteínas induzidas pela fixação, expondo os epítopos do antígeno.

Resfrie a lâmina para evitar danos aos tecidos induzidos pelo calor e, em seguida, enxágue para remover o excesso de tamponamento.

Aplique uma barreira hidrofóbica e coloque a lâmina em uma câmara de umidade.

Adicione um tampão de bloqueio de permeabilização. O detergente do tampão permeia as membranas celulares e as proteínas de bloqueio mascaram locais de ligação não específicos para reduzir a coloração de fundo.

Remova o excesso de tampão, adicione um coquetel de anticorpos conjugados com metal e incube para permitir a ligação do anticorpo a antígenos específicos.

Lave a lâmina, removendo os anticorpos não ligados.

Adicione uma coloração nuclear conjugada com metal que entra nas células e se liga ao DNA.

Enxágue o excesso de manchas e seque a lâmina.

Usando um scanner óptico, obtenha imagens de alta resolução das características estruturais do tecido, o que ajuda na interpretação dos dados da análise de citometria de massa da