Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:44 min. • July 8th, 2025
Pegue uma pipeta de estimulação contendo fluoróforos vermelhos insensíveis ao cálcio no líquido cefalorraquidiano artificial, ou ACSF.
Posicione a pipeta perto do neurônio alvo em uma fatia do hipocampo.
Coloque uma pipeta de adesivo com um eletrodo de registro banhado em um eletrólito contendo fluoróforos vermelhos insensíveis ao cálcio e indicadores de cálcio verde perto do alvo.
Aplique pressão positiva constante para perturbar brevemente a superfície do tecido, indicando proximidade com o alvo.
À medida que a covinha se forma na membrana neuronal, libere a pressão para formar uma vedação.
Aplique pressão negativa para apertar a vedação.
Estabilize o potencial da membrana em uma tensão negativa constante.
Continue com pressão negativa para romper a membrana, permitindo que os eletrólitos contendo fluoróforo se espalhem dentro do neurônio.
Visualize a fluorescência vermelha da coluna dendrítica alvo e alinhe a pipeta de estimulação perto dela.
Aplique pulsos elétricos para abrir os canais de cálcio.
Use microscopia de dois fótons para visualizar mudanças transitórias nos níveis de cálcio, conforme indicado pela fluorescência verde.
Nesta etapa, transfira uma fatia do hipocampo pa
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