Microinjeção de Drogas com Registro Eletrofisiológico em Cérebro de Rato

Comece com um injectrode, um sistema de injeção contendo eletrodo. Isso apresenta uma microagulha e um eletrodo de fio de prata inserido dentro de uma micropipeta de vidro.

Encha a injeção com uma solução de medicamento de teste contendo um corante para facilitar o rastreamento da disseminação do medicamento no cérebro.

Coloque uma seringa cheia de óleo mineral na injeção. Limpe o excesso de líquido.

Prenda este injetor em uma unidade estereotáxica e conecte-o a um sistema de microbomba.

Posicione o injetado na região alvo do cérebro de um rato anestesiado com um orifício cirúrgico no crânio.

Abaixe gradualmente o injectrode para penetrar na região alvo.

Interrompa a inserção ao receber sinais elétricos específicos que confirmem o posicionamento ideal da injetora.

Cubra o crânio exposto com ágar quente para evitar o ressecamento do tecido.

Permita que o tecido cerebral se estabilize.

Injete a dosagem desejada do medicamento.

Registre sinais elétricos para monitorar a atividade neuronal em resposta ao medicamento administrado.

Prepare o injectrode enchendo primeiro uma seringa de 5 a 10 microlitros com óleo mineral. Em seguida, prepare o medicamento de interesse com um corante em soro fisiológico. Aqui, 0,5% de Chicago Sky blue é misturado com GABA de 300 micromolares. Agora, encha a pipeta de injeção carregando primeiro uma seringa de 1 mililitro com a solução preparada e, em seguida, usando a seringa para carregar a pipeta.

Ao remover a seringa, mantenha uma leve pressão no êmbolo para que o vácuo não remova a solução da injeção. Verifique se há fluido escapando em possíveis pontos de vazamento. Limpe o excesso de líquido e verifique novamente se há vazamentos. Agora coloque a micro-seringa com óleo mineral na injeção. Em seguida, limpe o excesso de solução com gaze.

Verifique a ponta de injeção. Deve ser possível fluir pequenas gotas de solução através dele. Caso contrário, ele está bloqueado ou vazando. Agora, monte com segurança o injectrode em um sistema de microbomba. Em seguida, mova a posição do injetado para as coordenadas alvo e abaixe o eletrodo até o colículo superior, que pode ser identificado através do registro dos potenciais evocados visuais.

Enquanto o eletrodo estiver abaixado, aplique uma pequena pressão positiva aplicando uma baixa taxa de injeção para evitar entupimento. Interrompa a injeção quando a estrutura for atingida. Depois de inserir o injetor, cubra o córtex exposto com ágar quente para evitar a dessecação. Após a colocação final do eletrodo, aguarde 30 minutos para permitir a estabilização do tecido ao redor do eletrodo. Em seguida, injete 400 a 800 nanolitros de solução a uma taxa de 40 nanolitros por minuto até a inativação da atividade neuronal no colículo superior.

O eletrodo deve mostrar uma redução nos picos durante a injeção da solução inibitória.