Estimulação de culturas neuronais padronizadas por um campo magnético

Pegue uma lamínula padronizada com uma cultura de anel neuronal dentro de uma placa de cultura contendo uma solução de registro extracelular.

Essas células são pré-incubadas com um corante fluorescente sensível ao cálcio para medir os níveis de cálcio intracelular.

Coloque a placa em um microscópio de fluorescência stage.

Posicione a bobina magnética circular conectada a um estimulador magnético concentricamente a uma distância adequada acima da cultura para garantir a estimulação ideal.

Usando o estimulador magnético, aplique alta tensão e corrente através da bobina para gerar um campo magnético variável no tempo.

Esse campo magnético induz um campo elétrico nos neurônios, gerando um potencial de ação.

Ao atingir o terminal nervoso, o potencial de ação ativa os canais de cálcio dependentes de voltagem, permitindo o influxo de cálcio na célula e a liberação de neurotransmissores na sinapse.

Essa liberação facilita a transmissão do sinal para os neurônios vizinhos por meio de conexões sinápticas.

Devido ao influxo de íons de cálcio, esses íons se ligam ao corante intracelular sensível ao cálcio, aumentando a fluorescência indicativa de atividade neuronal.

Para iniciar a estimulação magnética, posicione uma cultura neuronal, cultivada em um padrão de forma circular, sob o microscópio. Estimule a cultura usando uma bobina de estimulação magnética circular padrão e um estimulador de suporte, que estão disponíveis comercialmente.

Para estimular as culturas com intensidades de campo magnético não padronizadas, conecte uma bobina de estimulação magnética personalizada ao estimulador personalizado. Em seguida, com o auxílio de um ponteiro laser, alinhe o centro da cultura ao centro da bobina para garantir uma estimulação bem-sucedida.

Ajuste a posição da bobina para que ela permaneça aproximadamente cinco milímetros acima do centro da cultura. Uma vez que a bobina de estimulação esteja posicionada corretamente, carregue o estimulador a um potencial de até cinco quilovolts. Em seguida, usando um interruptor de alta corrente e alta tensão, descarregue a alta tensão e a corrente através da bobina de estimulação para gerar um pulso magnético que estimule a atividade dos neurônios cultivados.