Preparando um modelo de rato para avaliar a integridade da via visual usando uma configuração de eletrofisiologia

A luz estimula os fotorreceptores do olho, enviando sinais elétricos ao córtex visual no cérebro para processar informações visuais.

Para medir a integridade dessa via visual, comece com um rato anestesiado e adaptado ao escuro em um quarto escuro.

Posicione um eletrodo VEP de referência ao redor dos dentes frontais inferiores do rato.

Prenda o rato com uma tira de fixação em uma plataforma ERG na frente de uma tigela Ganzfeld, um dispositivo de iluminação de luz dentro de uma gaiola de Faraday.

Coloque os eletrodos ERG de referência ao redor do equador do olho, circundando o anel escleral, e prenda-os.

Em seguida, conecte os eletrodos ativos do VEP aos parafusos cranianos pré-implantados para detectar sinais corticais.

Posicione os eletrodos ERG com lubrificante no centro dos olhos para medir suas respostas aos estímulos luminosos.

Remova o excesso de lubrificante e insira um eletrodo de aterramento na cauda para reduzir o ruído elétrico.

Aproxime a plataforma ERG da tigela Ganzfeld e feche a gaiola de Faraday para minimizar a interferência externa.

Para gravações escotópicas, todos os procedimentos são realizados em uma sala escura. Para fins ilustrativos, o posicionamento do eletrodo é realizado sob iluminação normal da sala aqui. O animal foi adaptado ao escuro por 12 horas e anestesiado com cetamina e xilazina.

Após a dilatação da pupila e anestesia tópica, enganche o eletrodo EP inativo ao redor dos incisivos inferiores. Em seguida, coloque o animal na plataforma ERG em frente à tigela ganzfeld situada na gaiola de Faraday. Prenda o animal à plataforma com uma tira de velcro, colocada firmemente, mas não firmemente ao redor da nuca.

Em seguida, posicione os eletrodos inativos do ERG circundando o anel escleral de forma não invasiva ao redor do equador do olho, aproximadamente três milímetros atrás do limbo. Estabilize isso prendendo os eletrodos à tira de velcro ao redor da nuca. Repita o procedimento para o olho contralateral.

Agora, aperte os eletrodos ativos do VEP prendendo garras jacaré aos parafusos de aço inoxidável pré-implantados no crânio. Antes da colocação do eletrodo ativo em ERG, coloque uma pequena gota de carboximetilcelulose sódica a 1% no eletrodo para melhorar a qualidade do sinal. Posicione os eletrodos ativos do ERG para tocar levemente a superfície central da córnea usando um micromanipulador conectado ao braço estereotáxico personalizado.

Certifique-se de que a carboximetilcelulose sódica entre em contato apenas com a córnea e não com a esclera, limpando o excesso de líquido. Em seguida, insira 2 a 5 milímetros do eletrodo de agulha de aterramento de aço inoxidável por via subcutânea na cauda. Deslize a plataforma para mais perto da tigela de ganzfeld e certifique-se de que os olhos do animal estejam alinhados com a abertura da tigela para permitir uma iluminação uniforme de ambas as retinas.

Em seguida, feche a gaiola de Faraday para reduzir ruídos estranhos.