Implantação de eletrodos em um córtex de camundongo para registros eletrocorticográficos

Pegue um camundongo anestesiado com o crânio exposto em uma estrutura estereotáxica. Este camundongo foi injetado com um vírus que expressa a proteína mutante de corte de actina no córtex cerebral direito.

Aparafuse um eletrodo eletrocorticográfico no local da injeção.

Marque e perfure o crânio perpendicularmente para o eletrodo posterior, eletrodo de referência e parafusos de manutenção.

Desinfete os locais com anti-séptico e bloqueie-os para evitar sangramento.

Insira os parafusos e eletrodos nos mesmos ângulos de perfuração e aplique cimento dental no espaço entre eles.

Agora, use a luz para solidificar o cimento.

Cubra as bases dos eletrodos e parafusos com cimento dental e aplique luz novamente. Prenda o conjunto com cimento acrílico. Suturar a pele.

Conecte os fios dourados dos eletrodos aos pinos do conector.

Cubra o espaço do conector com cimento acrílico.

Permita que o mouse se recupere. Após a recuperação, registre os sinais do córtex cerebral em resposta à injeção viral.

Para o implante do eletrodo, use uma pinça Kelly reta para aparafusar lentamente um eletrodo eletrocorticográfico com um fio de ouro reto, no eixo vertical do orifício no qual o AAV foi injetado, deixando pelo menos 2,5 milímetros de parafuso fora do crânio para minimizar os danos à dura-máter e ao córtex cerebral.

Use uma caneta para marcar a posição do eletrodo de referência 2,6 milímetros lateralmente à direita da linha média e 0,7 milímetros posterior à bregma, e a posição do eletrodo eletrocorticográfico posterior a 1,5 milímetros lateral à direita da linha média e 1,5 milímetros anterior à lambda, e as posições de três parafusos de manutenção no hemisfério esquerdo sem coordenadas específicas, mas o mais distante possível um do outro e dos eletrodos eletrocorticográficos.

Use a broca para perfurar cuidadosamente o crânio perpendicularmente à superfície do crânio nas posições marcadas dos outros eletrodos e parafusos e lave o crânio perfurado com uma solução de iodopovidona a 10%.

Bloqueie os furos com pequenos pedaços enrolados de lenço delicado antes de instalar os parafusos para evitar sangramento e contaminação, e use uma pinça Kelly reta para inserir os parafusos nos furos no mesmo ângulo em que os furos foram perfurados. Coloque algumas pequenas gotas de cimento dental no centro do espaço em forma de anel dentro dos parafusos. Depois de cobrir os olhos do animal, aplique luz por três a cinco minutos para solidificar o cimento e use cimento dental adicional para cobrir a base dos eletrodos eletrocorticográficos e os parafusos de ancoragem para formar um contorno em forma de coroa.

Depois de aplicar mais três a cinco minutos de luz, preencha o centro da montagem com cimento acrílico e remova as pinças cirúrgicas.

Use uma sutura de monofilamento absorvível sintético para fechar a pele na frente e atrás da montagem para que o crânio não fique exposto e use uma pinça curva para segurar o conector acima da montagem para alinhar cuidadosamente os fios de ouro dos eletrodos com os pinos do conector. Em seguida, solde rapidamente cada extremidade do eletrodo a um único pino conector correspondente.

Depois de remover o mouse do quadro, cubra o espaço vazio entre o conector e a cabeça com o cimento acrílico e, após a pesagem, coloque o mouse em uma gaiola limpa com uma tampa sem malha em uma almofada térmica.