Uma abordagem não invasiva para estudar a eletrofisiologia dos neurônios motores em embriões de peixe-zebra

Coloque embriões de peixe-zebra geneticamente modificados sob um estereomicroscópio e observe o enrolamento espontâneo da cauda desencadeado pelos neurônios motores da medula espinhal.

As propriedades intrínsecas desses neurônios causam o influxo de íons através dos canais de sódio, levando à despolarização espontânea da membrana e à geração de potenciais de ação que se propagam para os músculos, desencadeando o enrolamento da cauda. Meça a frequência de enrolamento.

Transfira alguns embriões para um bloqueador dos canais de sódio para inibir o influxo de sódio e avaliar a frequência de enrolamento reduzida.

Monte embriões não tratados em agarose derretida; deixe a agarose solidificar para restringir o movimento e observe sob um microscópio de fluorescência.

Os neurônios motores expressam um biossensor com um domínio de detecção de voltagem ligado à membrana, ou VSD, fundido a fluoróforos doadores e aceptores.

A despolarização altera a conformação do VSD, aproximando os fluoróforos.

Após a excitação, o doador transfere energia para o receptor, causando emissão de fluorescência do aceitador.

Adicione o bloqueador para inibir a despolarização, o que reduz a emissão do aceptor, confir