Medindo potenciais de ação muscular compostos em músculos de membros anteriores de camundongos in vivo

Prenda um mouse anestesiado em decúbito dorsal.

Insira subcutaneamente os eletrodos estimulantes, alinhando-os com o nervo que inerva o músculo do membro anterior.

Insira subcutaneamente o eletrodo de registro na parte superior do músculo do braço, o eletrodo de referência nas almofadas de caminhada e o eletrodo de aterramento na lateral.

Aplique pulsos elétricos para estimular os neurônios do membro anterior, induzindo um influxo de íons positivos e geração de potencial de ação.

O potencial de ação induz a liberação de neurotransmissores excitatórios na junção neuromuscular, levando à ativação e contração das fibras musculares.

Registre a resposta combinada de todas as fibras musculares - o Potencial de Ação Muscular Composto, ou CMAP.

Aplique estímulos máximos para garantir a estimulação de todas as fibras musculares.

Termine a estimulação e determine a latência, o atraso de tempo entre o início do estímulo e a resposta.

O aumento da latência indica diminuição da velocidade de condução devido à desmielinização neuronal.

Meça a amplitude do CMAP; uma magnitude diminuída indica a perda de neurônios funcionais.

Para medir o CMAP nos membros anteriores, posicione o mouse na almofada de aquecimento na posição supina e use fita adesiva para estender os dois membros anteriores nas laterais do corpo. Em seguida, coloque 5 milímetros do eletrodo estimulante por via subcutânea sem perfurar os músculos subjacentes em ambos os lados do membro anterior para alinhar com o nervo do plexo braquial.

Em seguida, coloque o eletrodo de registro por via subcutânea acima do músculo bíceps braquial. Em seguida, coloque 3 milímetros do eletrodo de referência em um ângulo de 30 graus nas almofadas de caminhada e insira o eletrodo de aterramento por via subcutânea na lateral do mouse.

Os eletrodos estão próximos uns dos outros nesta configuração. Evite que os eletrodos se toquem, pois isso distorce a gravação.

Estimule todos os axônios usando um pulso por segundo com duração de estímulo de 0,1 milissegundo. Para adquirir dados, inicie a estimulação pressionando o botão de estímulo recorrente na unidade controladora e gire o botão do controlador de intensidade para aumentar o estímulo.

Para atingir estímulos supramáximos, aplique estímulos crescentes girando o botão do controlador de intensidade até que a amplitude da resposta CMAP pare de aumentar. A partir daí, aumente o estímulo em 20% para garantir que a amplitude do CMAP tenha atingido sua resposta máxima. Termine a estimulação pressionando o botão de estímulo recorrente novamente.

Use a ferramenta de marcador para indicar os seguintes pontos na gravação: início da resposta, pico positivo máximo e pico negativo máximo. O início do estímulo é determinado automaticamente pelo software.

Determine a latência como um atraso desde o início do estímulo até o início da resposta. Use a latência para avaliar a desmielinização nos axônios. Meça a amplitude do pico máximo negativo ao pico máximo positivo e use a magnitude da amplitude para correlacionar o número de axônios funcionais.