Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:42 min. • July 8th, 2025
Comece com um rato anestesiado preso em uma estrutura estereotáxica com o crânio exposto.
Use pontos de referência no crânio para calibrar e marcar as coordenadas desejadas.
Faça furos nos locais marcados.
Remova os detritos e abra a camada externa do cérebro.
Lave frequentemente os orifícios com solução salina para evitar a secagem.
Faça furos adicionais e parafusos de ancoragem para apoiar os eletrodos.
Instale os eletrodos de referência e eletrodos de registro eletrofisiológico. Prenda-os aplicando resina acrílica.
Organize os eletrodos de microfios de tungstênio em uma estrutura de acordo com os locais de vários alvos no cérebro.
Vários eletrodos permitem o registro simultâneo de atividades cerebrais de vários locais-alvo.
Usando o ponto de referência no crânio, posicione os eletrodos de microfios de tungstênio.
Insira-os suavemente no cérebro.
Configure o software de gravação para detectar a atividade cerebral.
Abaixe os eletrodos até a profundidade desejada e comece a registrar os dados.
Sob o microscópio, use uma ferramenta de alinhamento de rato estereotáxica padrão para calibrar a ponta designada para o bregma e ajuste a barra incisiva até que os pontos designados para o bregma e lambda na ferramenta toquem o crânio ao mesmo tempo. Usando um suporte estereotáxico com cânula, calibre-o para o bregma e, em seguida, calcule a posição de todos os furos no crânio.
Em seguida, marque as posições dos orifícios a serem perfurados arranhando cuidadosamente o crânio ou usando um marcador de cor cirúrgico. Em seguida, usando uma micro-broca, faça cuidadosamente todos os furos com um diâmetro de cerca de 1 milímetro. Para o STN e SNr, faça um furo comum de aproximadamente 2 milímetros por 3 milímetros.
Pegue uma cânula fina e dobre a ponta para formar dois ganchos. Em seguida, use os ganchos para remover quaisquer detritos dos furos e corte e remova cuidadosamente a dura-máter no orifício STN/SNr comum. Depois disso, lave os furos com soro fisiológico.
Aplique uma gota de soro fisiológico a cada 15 minutos nos furos para evitar que o cérebro e a dura-máter sequem. Em seguida, pegue uma micro-broca e um micro parafuso de aço inoxidável correspondente. Faça um furo e aparafuse um microparafuso entre os furos dos eletrodos epidurais de referência acima do cerebelo.
Em seguida, guie as pontas dos eletrodos com uma pinça fina e deslize-as diretamente abaixo do osso do crânio nos orifícios. Fixe todos os eletrodos epidurais com acrílico dental de dois componentes. Certifique-se de não cobrir o ponto de bregma nem afetar o orifício STN/SNr comum.
Em seguida, insira o suporte preparado com os eletrodos de microfios de tungstênio na estrutura estereotáxica. Calibre o eletrodo mais ventral para o bregma, que se destina a atingir o STN. Ajuste para a posição calculada acima do orifício STN/SNr comum e abaixe os eletrodos até o cérebro.
Certifique-se de que os eletrodos de microfios de tungstênio entrem no cérebro sem problemas. Neste procedimento, configure o software de gravação, como o filtro passa-banda, e amp o sinal de dados brutos. Em seguida, use um LFP online e um filtro de pico com as configurações apropriadas.
Para todos os filtros, use um filtro do tipo Butterworth. Configure um limite de pico para classificação de pico online. A maioria dos softwares de gravação permite a configuração de um limite de pico, que é um valor de amplitude acima do limite em que um sinal é marcado como pico pelo software. Em seguida, abaixe lentamente os eletrodos de microfios de tungstênio para 1 milímetro acima do STN e espere que o sinal se estabilize, se necessário.